Pour cultiver un blob, la gelose se prépare en mélangeant 15 g d’agar-agar, 15 g de glucose et 2,5 g de levure de bière dans 1 litre d’eau distillée, puis en stérilisant le tout à 121 °C pendant 20 minutes à l’autoclave. Cette recette standard, dite « agar nutritif faible », donne un milieu gélifié stable, pauvre en nutriments, idéal pour le plasmode de Physarum polycephalum : il se déplace, fusionne et sporule sans risque de contamination bactérienne excessive. Versez la solution encore liquide (à environ 50 °C) dans des boîtes de Pétri stériles, sur une hauteur de 3 à 5 mm, et laissez refroidir à température ambiante avant ensemencement. Sans autoclave, une stérilisation par trois cycles de 30 minutes à 100 °C (tyndallisation) fonctionne, mais augmente le risque de moisissures. Le blob se conserve ensuite plusieurs semaines sur ce milieu à 22-25 °C, à l’obscurité, avec repiquage tous les 7 à 10 jours. La précision des proportions et la stérilité conditionnent directement la réussite de la culture.
Créer une gelose pour cultiver le blob : l essentiel à retenir
La gelose pour blob se prépare en 15 minutes avec 3 ingrédients : eau, agar-agar et flocons d’avoine. Le ratio standard est de 15 g d’agar-agar et 30 g de flocons d’avoine pour 1 litre d’eau. Ce mélange donne une gélose ferme (pH ~6,5) qui supporte la migration du plasmode sans le noyer.
Étapes clés :
- Mixez 30 g de flocons d’avoine dans 500 ml d’eau (30 secondes, vitesse maximale). Filtrez au chinois pour ne garder que le lait d’avoine.
- Ajoutez 500 ml d’eau supplémentaire et 15 g d’agar-agar en poudre. Portez à ébullition en remuant constamment.
- Laissez bouillir 2-3 minutes : l’agar doit être totalement dissous (solution translucide, sans grains).
- Versez à chaud dans les boîtes de Pétri (3-4 mm de hauteur). Laissez refroidir à température ambiante 30 minutes.
Points critiques :
- Ne pas autoclaver : une ébullition simple suffit, l’agar-agar gélifie à 35-40°C et fond à 85°C. Une surchauffe dégrade les nutriments.
- Épaisseur : moins de 2 mm = dessèchement rapide ; plus de 5 mm = risque de condensation et de contamination bactérienne.
- Conservation : les boîtes se gardent 2 semaines au réfrigérateur, filmées. Ne jamais congeler (la gélose devient cassante).
Variantes selon l’usage :
| Type de culture | Agar-agar (g/L) | Flocons d’avoine (g/L) | Particularité |
|---|---|---|---|
| Standard (maintenance) | 15 | 30 | Équilibre nutritionnel optimal |
| Migration rapide | 12 | 30 | Gélose plus molle, déplacement plus rapide |
| Conservation longue | 20 | 20 | Réduit la croissance bactérienne |
| Sporulation | 15 | 10 | Stress nutritionnel, favorise les sclérotes |
Erreurs fréquentes à éviter :
- Agar non dissous : des grains blancs restent visibles → refaites chauffer 1 minute en remuant.
- Gelose trop liquide : la boîte penchée, le milieu coule → ajoutez 2-3 g d’agar par litre.
- Contamination : les moisissures apparaissent en 48h si les boîtes sont ouvertes avant refroidissement complet. Attendez 1 heure après prise.
Alternative sans agar : la gélatine alimentaire (10 g/L) fonctionne, mais fond à 30°C — inutilisable au-delà de 25°C. L’agar-agar est le seul choix fiable pour une culture à 22-25°C.
Rendement : 1 litre de gelose = environ 20 boîtes de Pétri de 90 mm. Pour un blob actif, renouvelez la gelose toutes les 3-4 semaines (le milieu s’acidifie et s’épuise).
Questions fréquentes
Combien de temps une gélose de blob se conserve-t-elle au réfrigérateur ? Une boîte de Pétri scellée avec du Parafilm se conserve 3 à 4 semaines à 4 °C. Au-delà, l’agar-agar se déshydrate et se fissure, rendant l’inoculation difficile. Pour un stockage long (6 mois), congelez les boîtes à -20 °C, mais le milieu perd en clarté.
Peut-on réutiliser une gélose après croissance du blob ? Non. Le sclérote ou le plasmode épuise les nutriments et libère des métabolites secondaires qui inhibent la repousse. Jetez la gélose contaminée ou usagée dans le compost, jamais dans l’évier (l’agar-agar peut obstruer les canalisations).
Pourquoi ma gélose ne prend-elle pas ? Trois causes probables : une mauvaise pesée (l’agar-agar doit représenter 1,5 à 2 % du volume total, soit 15 à 20 g/L), une eau trop acide (pH < 5,5 : ajoutez 0,5 g/L de phosphate dipotassique), ou une ébullition insuffisante (l’agar-agar doit bouillir 2 minutes pour s’hydrater complètement).
Faut-il stériliser à l’autocuiseur ou au four ? L’autocuiseur (15 minutes à 121 °C) est la méthode de référence. Le four (2 heures à 160 °C) fonctionne mais dégrade partiellement les nutriments et provoque une évaporation non maîtrisée. Sans autocuiseur, trois ébullitions successives de 5 minutes à 24 h d’intervalle réduisent la contamination mais ne stérilisent pas totalement.
Quelle gélose choisir : agar-agar alimentaire ou bactériologique ? L’agar-agar alimentaire (type Alsa) convient pour un blob nourri avec des flocons d’avoine. L’agar bactériologique (grade laboratoire, environ 40 €/kg) est plus pur, donne un gel plus transparent et contient moins d’impuretés qui peuvent favoriser les moisissures. Pour un usage occasionnel, l’alimentaire suffit.
Peut-on faire une gélose sans agar-agar ? Non, pas avec les mêmes propriétés. La gélatine animale fond à 30 °C, alors que le blob de Physarum polycephalum se cultive idéalement entre 22 et 25 °C, mais supporte des pics à 28 °C. Le gel de silice ou le carraghénane (2 % dans l’eau) sont des alternatives, mais leur préparation est plus délicate et leur coût supérieur.
Comment savoir si ma gélose est contaminée ? Une contamination bactérienne apparaît en 24-48 h sous forme de colonies blanches, jaunes ou roses, souvent visqueuses. Les moisissures (vertes, noires) mettent 3 à 5 jours à se développer. Un blob sain produit un réseau de veines jaunes brillantes. En cas de doute, écartez la boîte : le plasmode est plus résistant que les bactéries, mais pas aux champignons compétitifs.
Quelle épaisseur de gélose est idéale ? Versez 15 à 20 mL de milieu par boîte de 90 mm, soit une épaisseur de 3 à 4 mm. Une couche trop fine (moins de 2 mm) se dessèche en 5 jours ; trop épaisse (plus de 6 mm), elle ralentit la migration du plasmode et gaspille les nutriments.
Peut-on ajouter des antibiotiques pour éviter les contaminations ? Oui, mais avec prudence. La pénicilline-streptomycine (100 U/mL et 100 µg/mL) inhibe les bactéries sans affecter le blob. Évitez le nystatine (antifongique) : il peut être toxique pour Physarum
Introduction à la gelose
La gelose est le support de culture standard pour le blob (Physarum polycephalum), car elle offre un milieu hydraté, nutritif et stable qui permet la croissance du plasmode et la conservation des sclérotes. Sa préparation repose sur un mélange précis d’agar-agar, d’eau et de nutriments, puis sur une stérilisation rigoureuse pour éviter toute contamination bactérienne ou fongique.
En bref : pour une gelose de base, mélangez 15 g d’agar-agar, 1 g de flocons d’avoine (ou 0,5 g de poudre de lait écrémé) et 1 L d’eau distillée, portez à ébullition, versez dans des boîtes de Pétri stériles, puis autoclaver ou chauffer à 121 °C pendant 15 minutes. Ce protocole donne un milieu gélifié en 30 minutes à température ambiante, avec une dureté suffisante pour supporter les déplacements du blob sans être trop rigide pour sa progression.
Le choix de l’agar-agar est crucial : utilisez un agar-agar de qualité bactériologique (pureté ≥ 95 %), car les agar-agar culinaires contiennent des impuretés et des sucres résiduels qui favorisent les contaminations. La concentration en agar-agar détermine la fermeté : 10 g/L donne une gelose molle (idéale pour les jeunes plasmodes), 15 g/L une gelose standard (polyvalente), et 20 g/L une gelose ferme (pour les cultures longues ou les repiquages fréquents). Au-delà de 25 g/L, le blob progresse difficilement et la surface se dessèche plus vite.
La composition nutritionnelle doit être minimale mais suffisante : les flocons d’avoine apportent des glucides complexes et des protéines, tandis que le lait écrémé fournit des acides aminés et des vitamines. Pour une culture sans particules visibles (utile pour l’observation microscopique), filtrez le mélange à travers un filtre à café ou une étamine avant stérilisation. Une alternative sans nutriments — gelose à 15 g/L uniquement — permet de conserver le blob en dormance plus longtemps, mais ralentit sa croissance de 40 à 60 % par rapport à un milieu enrichi.
Le pH optimal se situe entre 5,5 et 6,5. L’eau du robinet, souvent calcaire (pH > 7,5), doit être remplacée par de l’eau distillée ou déminéralisée ; sinon, ajustez avec quelques gouttes d’acide citrique à 10 %. La stérilisation est l’étape la plus critique : une simple ébullition à 100 °C ne tue pas les spores bactériennes résistantes. Utilisez un autocuiseur (15 minutes à 121 °C, pression 1 bar) ou un autoclave de laboratoire. Sans autocuiseur, trois cycles de chauffage à ébullition espacés de 24 heures (tyndallisation) réduisent les contaminations de 90 %, mais restent moins fiables.
Le refroidissement doit être rapide mais contrôlé : versez la gelose liquide à environ 50 °C dans les boîtes de Pétri (20 mL par boîte de 90 mm), puis laissez solidifier à température ambiante avec les couvercles légèrement entrouverts pour éviter la condensation. Une fois prise, la gelose se conserve 2 à 3 semaines au réfrigérateur dans un sac hermétique, mais son hydratation diminue progressivement : au-delà de 10 jours, la surface se rétracte et le blob migre moins efficacement.
Préparation de la gelose
La préparation se fait en deux temps : dissolution de l’agar-agar dans le milieu nutritif, puis stérilisation à l’autoclave ou en cocotte-minute. Le ratio standard est de 15 g d’agar-agar par litre de milieu, soit 1,5 % (poids/volume). En dessous de 12 g/L, le gel reste fragile et se déchire lors du transfert du blob ; au-dessus de 20 g/L, il devient trop ferme et ralentit la migration du plasmode.
Étapes concrètes :
- Peser l’agar-agar (poudre fine, type bactériologique ou agar-agar alimentaire pur, sans additif). Pour 500 mL de milieu, pesez 7,5 g.
- Mélanger à froid : versez l’agar-agar dans l’eau distillée ou le milieu liquide (eau de source non chlorée, ou eau + 2 % de flocons d’avoine pour un milieu nutritif). Agitez vigoureusement : l’agar ne se dissout pas à froid, il doit être en suspension homogène pour éviter les grumeaux.
- Chauffer jusqu’à ébullition : portez à 100 °C en remuant. L’agar doit bouillir au moins 1 à 2 minutes pour être totalement hydraté. Un liquide trouble indique une dissolution incomplète ; il doit devenir translucide.
- Répartir dans les contenants : versez le liquide chaud dans des boîtes de Pétri (20 à 25 mL par boîte de 90 mm) ou des petits pots en verre stériles. Remplissez à mi-hauteur pour laisser de l’espace.
- Stériliser : autoclavage à 121 °C pendant 20 minutes (cycle liquide). Sans autoclave, utilisez une cocotte-minute : 15 minutes après la mise en rotation de la soupape. Ne stérilisez jamais après coulage en boîte de Pétri en plastique (fusion) ; coulez après stérilisation si vous utilisez du plastique.
- Coulage : si vous avez stérilisé en flacon, coulez à chaud (60-70 °C) dans les boîtes stériles. Laissez refroidir à température ambiante 30 à 45 minutes. Le gel prend vers 35-40 °C.
- Contrôle qualité : une boîte prête doit être ferme au toucher, sans synérèse (eau en surface). Si des bulles se forment, flambez rapidement la surface au chalumeau ou attendez qu’elles remontent avant prise.
Tableau des concentrations utiles :
| Usage | Agar-agar (g/L) | Texture |
|---|---|---|
| Culture standard | 15 | Ferme, idéale pour repiquage |
| Milieu pauvre (eau gélosée) | 12-15 | Fragile, pour conservation courte |
| Milieu enrichi (avoine) | 15-18 | Résiste à la croissance rapide |
Points critiques : l’eau chlorée inhibe la gélification (utilisez de l’eau distillée ou minérale non gazeuse) ; l’agar-agar en flocons nécessite 2 à 3 minutes d’ébullition supplémentaires par rapport à la poudre ; ne recoulez jamais un gel déjà pris (il devient cassant après une seconde fusion). Les boîtes préparées se conservent 2 à 3 semaines à 4 °C, filmées pour éviter la déshydratation.
Utilisation de la gelose
Une fois coulée et solidifiée, la gelose sert de substrat nutritif standardisé pour le blob (Physarum polycephalum). Son rôle principal est de fournir une surface humide et stable pour la croissance du plasmode, tout en limitant les contaminations.
Préparation du milieu avant ensemencement : La gélose doit être à température ambiante (20-25 °C) et exempte de condensation en surface. Si des gouttelettes se forment, retournez la boîte de Pétri ou laissez-la sécher 10-15 minutes sous flux laminaire ou à l’air libre couvert. Un excès d’eau rend le milieu trop liquide et favorise les bactéries.
Dépôt du blob : Déposez un fragment de plasmode (ou un sclérote) de 0,5 à 1 cm² au centre de la gélose, à l’aide d’une pince stérile. Ne pas enfoncer le fragment : il doit reposer en surface pour capter l’oxygène. Pour un sclérote, humidifiez-le légèrement avec une goutte d’eau stérile pour accélérer la germination (24-48 h).
Conditions de culture : Incubez à l’obscurité ou en lumière diffuse (le blob n’a pas besoin de lumière pour se nourrir), à 22-25 °C. La croissance est visible en 12-24 h : le plasmode s’étend en réseau de veines. Sur une gélose à 2 % d’agar, la vitesse de migration est d’environ 1-2 cm/jour à 24 °C.
Nourrissage : La gélose seule (même enrichie en flocons d’avoine) s’épuise en 3-5 jours. Pour des cultures longues, déposez 1-2 flocons d’avoine (ou un morceau de 2-3 mm) directement sur le plasmode tous les 2-3 jours. Évitez de déposer la nourriture sur la gélose loin du blob : il ne la détectera pas à distance.
Transfert et repiquage : Pour repiquer, découpez un bloc de gélose de 1 cm² contenant le plasmode avec un scalpel stérile, puis transférez-le sur une nouvelle boîte. Le blob peut être repiqué indéfiniment (toutes les 5-7 jours) sans perte de viabilité, à condition de maintenir l’hygrométrie.
Tableau récapitulatif des paramètres clés
| Paramètre | Valeur optimale | Conséquence si non respecté |
|---|---|---|
| Température | 22-25 °C | < 15 °C : croissance ralentie ; > 30 °C : stress, sporulation |
| Humidité | 90-100 % HR | Gélose sèche : arrêt de croissance, formation de sclérotes |
| pH de la gélose | 5,5-6,5 | pH > 7 : favorise les moisissures |
| Épaisseur de gélose | 3-5 mm | Trop fine : dessèchement rapide ; trop épaisse : gaspillage |
| Stérilité | Surface exempte de contaminants | Contamination bactérienne en 24-48 h |
Dépannage courant : Si le blob ne migre pas, vérifiez l’humidité (la gélose doit être brillante, pas mate) et la température. Si des moisissures apparaissent (taches vertes ou noires), découpez immédiatement la zone contaminée et repiquez le blob sur un milieu neuf. La gélose à 2 % d’agar est plus résistante aux contaminants qu’une gélose molle (1 %), car elle limite la diffusion des spores.
Entretien du blob
Une fois le blob établi sur gélose, l’entretien se résume à trois paramètres : humidité, nourriture et repiquage. Le taux de réussite dépend de la régularité, pas de la complexité.
Humidité : la priorité absolue. Le blob est un organisme plasmodial, composé à plus de 90 % d’eau. Une gélose qui sèche en périphérie stoppe la croissance et déclenche la sclérotisation (formation d’une croûte dure). Vérifiez la condensation sur le couvercle de la boîte de Pétri : si elle disparaît, ajoutez 2 à 3 ml d’eau stérile (ou eau déminéralisée) sur la gélose avec une pipette. Refermez immédiatement. Ne versez jamais d’eau directement sur le blob si vous voulez éviter de diluer ses enzymes digestives.
Nourriture : flocons d’avoine, pas autre chose. Le régime standard est le flocon d’avoine complet (type Quaker, sans sucre ajouté). Déposez 1 à 2 flocons directement sur le blob, ou à 1 cm de son front de croissance. La consommation est visible en 24–48 h : le blob jaunit et le flocon se déforme. Ne le nourrissez que lorsque la gélose est parcourue de veines visibles, soit environ tous les 3 à 5 jours à 22–24 °C. Sur-nourrir provoque une fermentation bactérienne (odeur aigre) et une liquéfaction de la gélose.
Température et lumière. La croissance optimale se situe entre 21 et 25 °C. Au-delà de 27 °C, le blob entre en stress et sclérotise. En dessous de 15 °C, il ralentit fortement sans mourir. La lumière n’est pas nécessaire : le blob n’est pas photosynthétique. Une lumière indirecte est tolérée, mais évitez le soleil direct qui chauffe la boîte et assèche la gélose.
Repiquage : tous les 10 à 14 jours. Sur une gélose nutritive standard (2 % agar, 1 % avoine), le blob épuise les nutriments en deux semaines. Pour repiquer, coupez un cube de gélose de 1 cm² portant le front de croissance (la zone la plus active, en bordure). Transférez-le sur une nouvelle boîte de gélose fraîche, face contre la gélose. Le blob migrera hors du cube en 24 h. Ne repiquez jamais un fragment sclérotisé : il faut le réhydrater 24 h sur eau stérile avant de le reposer sur gélose.
Signes d’alerte. Une gélose qui se liquéfie = contamination bactérienne (jetez la boîte, ne repiquez pas). Des taches noires ou vertes = moisissures (aspergillus ou penicillium), souvent dues à une gélose trop riche ou à un couvercle ouvert trop longtemps. Un blob qui ne bouge plus malgré humidité et nourriture = sclérotisation involontaire ; réhydratez-le ou repiquez un fragment actif.
Tableau récapitulatif des paramètres d’entretien
| Paramètre | Valeur optimale | Signe de dérive | Action |
|---|---|---|---|
| Humidité | Condensation visible sur couvercle | Gélose craquelée, bords secs | Ajouter 2–3 ml eau stérile |
| Nourriture | 1–2 flocons d’avoine / 3–5 jours | Flocon non consommé après 72 h | Réduire la fréquence |
| Température | 21–25 °C | Sclérote dur, arrêt de migration | Déplacer dans une pièce plus fraîche |
| Repiquage | Tous les 10–14 jours | Gélose jaunie, veines fines | Repiquer le front de croissance |
En conditions
Questions fréquentes .
Combien de temps se conserve une gélose non ensemencée ? Une gélose en boîte de Petri scellée avec du Parafilm se conserve 3 à 4 semaines à 4 °C. Au-delà, l’eau s’évapore et la surface se dessèche, rendant l’inoculation inefficace. Pour une conservation longue, versez la gélose en tubes inclinés (pentes) et stockez-les 2 à 3 mois à l’abri de la lumière.
Peut-on réutiliser une gélose après croissance du blob ? Non. Une fois le blob (sclérote ou plasmode) développé, le milieu est épuisé et contaminé par des métabolites. La réutilisation provoque des carences nutritionnelles et des contaminations bactériennes. Jetez les boîtes usagées dans un sac autoclavable ou à la poubure après désinfection à l’eau de Javel diluée (10 %).
Pourquoi ma gélose ne prend-elle pas ? Cause la plus fréquente : l’agar-agar n’a pas été porté à ébullition complète. Il doit bouillir 1 à 2 minutes pour s’hydrater et gélifier. Vérifiez aussi le pH : un pH acide (inférieur à 5) hydrolyse l’agar. Ajustez avec du KOH 1 M si vous utilisez des acides (ex. jus de citron). Enfin, la concentration doit être de 15 à 20 g/L ; en dessous de 12 g/L, le gel reste mou.
Quelle est la différence entre agar-agar et gélose ? Aucune. « Gélose » est le terme technique pour le polysaccharide extrait d’algues rouges (Gelidium, Gracilaria). « Agar-agar » est le nom commercial courant. Pour le blob, utilisez un agar bactériologique (pureté élevée, sans impuretés) plutôt qu’un agar culinaire, qui contient des sucres résiduels favorisant les contaminations.
Faut-il ajouter un antibiotique à la gélose ? Non, sauf si vous travaillez en conditions non stériles. Le blob (Physarum polycephalum) tolère mal les antibiotiques à forte dose ; la streptomycine (50 µg/mL) est utilisable mais peut ralentir la croissance. Privilégiez une stérilisation rigoureuse (autoclave 15 min à 121 °C) et un travail sous flux laminaire ou près d’une flamme.
Peut-on faire de la gélose sans autoclave ? Oui, avec une cocotte-minute (15 min à pression maximale) ou trois cycles de stérilisation par tyndallisation (30 min à 100 °C, refroidissement, répété 3 jours). La cuisson simple à l’eau bouillante ne stérilise pas : elle tue les formes végétatives mais pas les spores bactériennes.
Quelle quantité de gélose préparer pour un blob ? Pour une boîte de Petri de 90 mm, comptez 20 mL de milieu. Pour 10 boîtes, préparez 250 mL (incluant 10 % de perte). Un sclérote de 1 cm² nécessite une boîte de 60 mm (15 mL) pour 2 semaines de croissance sans épuisement.
Tableau récapitulatif des erreurs courantes
| Erreur | Symptôme | Correction |
|---|---|---|
| Agar non bouilli | Gel mou ou liquide | Porter à ébullition 2 min |
| pH < 5 | Pas de gélification | Ajuster à pH 6-7 |
| Autoclave trop court | Contaminations en 48 h | 15 min à 121 °C |
| Surcharge en glucose | Croissance bactérienne | Limiter à 5 g/L |
| Boîtes non scellées | Dessèchement en 5 jours | Parafilm + stockage 4 °C |
Puis-je congeler de la gélose ? Oui, mais une seule
Questions fréquentes
Quelle est la recette de base pour préparer de la gélose pour le blob ?
Mélangez 15 g d’agar-agar en poudre et 5 g de glucose (ou de maltose) dans 1 litre d’eau déminéralisée. Portez à ébullition en agitant jusqu’à dissolution complète, puis stérilisez le mélange à l’autoclave (ou en cocotte-minute) à 120 °C pendant 20 minutes. Versez ensuite la solution encore liquide dans des boîtes de Pétri stériles, en couche de 3 à 5 mm.
Pourquoi faut-il utiliser de l’agar-agar et pas un autre gélifiant ?
L’agar-agar est un polysaccharide extrait d’algues rouges, non dégradé par les enzymes du blob (Physarum polycephalum). Contrairement à la gélatine animale, il reste solide à température ambiante et supporte la chaleur de stérilisation, offrant un support stable et hydraté pour la croissance du plasmode.
Quelle concentration d’agar-agar est idéale pour une culture de blob ?
Une concentration de 1,5 % (soit 15 g/L) est standard : elle donne une gélose ferme mais pas trop dure, facile à découper et à transférer. Une concentration plus faible (1 %) rend la surface trop molle, tandis que 2 % ou plus devient difficile à manipuler et ralentit la migration du blob.
Faut-il ajouter des nutriments supplémentaires dans la gélose ?
Oui, pour une croissance optimale, ajoutez 5 g/L de glucose ou de maltose comme source de carbone. Certains ajoutent aussi 1 g/L d’extrait de levure ou de peptone pour favoriser la sporulation, mais un excès de nutriments peut provoquer une contamination bactérienne. Pour une simple conservation, une gélose sans nutriment (eau + agar) suffit.
Comment stériliser la gélose sans autoclave ?
Si vous n’avez pas d’autoclave, utilisez une cocotte-minute : placez le flacon de gélose fermé (sans visser le bouchon) dans la cocotte avec 2 cm d’eau, puis portez à pression maximale (120 °C) pendant 20 minutes. Laissez refroidir à 50-60 °C avant de couler en boîtes. Une stérilisation par ébullition simple (100 °C) n’est pas suffisante pour éliminer toutes les spores.
Combien de temps la gélose préparée se conserve-t-elle ?
Une fois coulée en boîtes de Pétri et refroidie, la gélose se conserve 2 à 3 semaines au réfrigérateur (4 °C), enveloppée dans un film plastique ou dans un sac hermétique pour éviter la déshydratation. Avant utilisation, laissez les boîtes revenir à température ambiante pour éviter la condensation sur la surface. Ne réutilisez pas une gélose qui montre des signes de contamination (taches, odeur).
Conseils et astuces
La réussite de la culture du blob repose sur la précision de la préparation de la gélose. Voici les points critiques à maîtriser.
Précision de la pesée : Utilisez une balance de précision au gramme près. Un excès d’agar-agar rend la gélose trop ferme, gênant la migration du plasmode. Une quantité insuffisante donne un gel fragile qui se déchire à la manipulation. Pour 20 g/L d’agar-agar, la texture idéale est celle d’un gel ferme mais souple, qui ne se brise pas lorsqu’on l’incline.
Dissolution sans grumeaux : Versez l’agar-agar en pluie fine dans l’eau froide ou le bouillon, jamais dans un liquide chaud. Remuez constamment pendant la montée en température. Portez à ébullition franche pendant 2 minutes minimum : c’est la seule garantie d’une gélification homogène. Un autocuiseur (15 minutes) ou un bain-marie à 95°C pendant 30 minutes sont des alternatives fiables.
Stérilisation réelle : Ne vous contentez pas d’un simple lavage. Les boîtes de Pétri et les erlenmeyers doivent être stérilisés à l’autoclave (121°C, 20 minutes) ou, à défaut, à l’eau bouillante pendant 30 minutes. Le blob est sensible aux moisissures et bactéries compétitrices. L’ajout d’antibiotiques (ampicilline 100 µg/mL) ou d’antifongique (nystatine) est recommandé pour les cultures non stériles, mais cela complexifie la préparation.
Coulage sans bulles : Versez la gélose à 50-55°C (quand le flacon est tiède au toucher). Trop chaude, elle crée de la condensation sur le couvercle, source de contamination. Trop froide, elle fige avant de s’homogénéiser. Inclinez légèrement la boîte pour répartir, puis laissez refroidir à plat, couvercle entrouvert, sous une hotte ou un flux laminaire si possible.
Conservation des boîtes : Les géloses préparées se conservent 2 à 3 semaines à 4°C, emballées dans un sac plastique pour éviter la déshydratation. Laissez-les revenir à température ambiante 30 minutes avant ensemencement pour éviter un choc thermique au blob.
Test de pH : Le blob préfère un pH acide (4,5 à 6,0). Si vous utilisez de l’eau du robinet, vérifiez son pH avec des bandelettes. Une eau trop calcaire (pH > 7) inhibe la croissance. Privilégiez l’eau déminéralisée ou ajustez avec quelques gouttes d’acide citrique.
Erreur fréquente : Ne réutilisez jamais une gélose ayant déjà servi. Les métabolites toxiques s’accumulent et le blob dépérit au second passage.
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